Классический бактериологический метод

Бактериологический (культуральный) метод исследования заключается в выявлении патогенных микроорганизмов и определении их чувствительности к антибиотикам. Процесс выявления микроорганизмов состоит из нескольких этапов:

• 1. Посев материала на питательные среды.
• 2. Получение чистых культур микроорганизмов.
• 3. Идентификация микроорганизмов.
• 4. Определение чувствительности к антибиотикам, антимикотиков.

Первый и второй этапы бактериологического исследования одинаковы и для классического, и для автоматического бактериологического методов.

Первый этап

Биологический материал высевают на питательные среды. Для каждого вида биологического материала используется определенный набор питательных сред. Это связано с тем, что в разных видах биологического материала находятся различные виды микроорганизмов и необходимо, чтобы выросли максимально все. Используются питательные среды общего назначения - на них растет подавляющее большинство микроорганизмов - кровяной агар, шоколадный агар; дифференциальные среды - позволяют отличать разные виды микроорганизмов - среда Эндо для энтеробактерий, селективные среды - растут только отдельные виды бактерий - энтерококагар для выявления энтерококков, маннитол-солевой агар для обнаружения стафилококков.

Посев делают таким образом, чтобы получить отдельные изолированные колонии.

Посевы помещают в термостат, как правило, на 24 ч при 37С. Некоторые посевы инкубируют при 28С, а некоторые в течение 48 часов. Посевы для выявления грибов рода Candida до 5 суток, мицелиальных грибов - до 30 суток.

Второй этап

Просматривают посевы на питательных средах. По внешнему виду колоний (размер, цвет, форма), определёнными быстрыми тестами и микроскопией определяют возможный вид микроорганизмов и их значение в конкретном случае. Избранные колонии отсеивают на универсальные питательные среды для накопления чистой культуры микроорганизмов. В случае роста колоний только одного вида можно проводить идентификацию и определение чувствительности без этапа накопления чистой культуры.

Третий этап

В зависимости от вида микроорганизма проводят его идентификацию (определение биохимических и антигенных свойств) с помощью фиксированного набора субстратов и сывороток. Субстратами являются углеводы, аминокислоты и другие сложные соединения. По результатам устанавливают род и вид микроорганизма.

Для установления вида некоторых микроорганизмов может потребоваться серологическая идентификация.

Все среды для идентификации и определения чувствительности к антибиотикам готовятся и стерилизуются отдельно. Такая процедура очень трудоемкая, то есть требует много ручного труда и времени, дополнительного оборудования. Таким образом у данного метода низкий уровень стандартизации.

Для идентификации некоторых требовательных клинически значимых видов микроорганизмов необходимы сложные и дорогие субстраты, которые в рутинной практике трудно готовить и использовать. Из-за этого спектр микроорганизмов, которые можно было бы идентифицировать, сужается по сравнению с возможностями автоматического анализатора.

Четвертый этап

Определение чувствительности к антибиотикам проводится с учетом результатов идентификации и вида биологического материала.

При использовании классического бактериологического метода, определение чувствительности к антибиотикам происходит диско-диффузным методом. Этот метод базируется на изучении зон задержки роста микроорганизма вокруг бумажного диска, который пропитан антибиотиком. В зависимости от зон задержки роста определяют устойчивые, умеренно-стойкие и чувствительные штаммы микроорганизмов к тому или иному антибиотику. Данный метод является наиболее распространенным для изучения чувствительности, а также дешевым и простым в исполнении. Однако он также плохо поддается стандартизации, поскольку требует много ручного труда.

Кроме того, согласно рекомендациям международных организаций, которые занимаются совершенствованием существующих методик и разработкой новых (EUCAST - Европейский комитет по определению чувствительности к антибиотикам, CLSI - Институт клинических лабораторных стандартов), чувствительность к некоторым антибиотикам НЕЛЬЗЯ определять диско-диффузным методом, поскольку не определены критерии оценки полученных результатов.

Например:

• 1. колистином - кишечная палочка, клебсиелла и другие энтробактерии, синегнойная палочка, ацинетобактер;
• 2. бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы), гликопептиды (ванкомицин, тейкопланин), даптомицином, фосфомицин – стафилококки;
• 3. даптомицином - стрептококки групп А, В, С и G;
• 4. меропенем - пневмококки при менингитах;
• 5. бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы) – пневмококки.

Кроме того существуют микроорганизмы, чувствительность которых к антибиотикам вообще нельзя определять диско-диффузным методом: Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, все анаэробные микроорганизмы, Helicobacter pylori, Candida spp., Aspergilus spp. и другие мицелиальные грибы.

В настоящее время проведения микробиологических исследований является важной и актуальной деятельностью в биологии и медицине, так как они позволяют с высокой степенью точности и достоверности подтвердить или опровергнуть факт присутствия в организме человека возбудителей инфекционных заболеваний. Классический бактериологический метод исследования решает задачи выделения чистой культуры возбудителя с его последующей идентификацией. Благодаря микробиологическим методам исследования можно установить возбудителей тех или иных инфекционных заболеваний и подобрать рациональное лечение этого заболевания.

Преимущества автоматического метода

1. Скорость получения результата. Результат наших исследований является максимально быстрым. Уже на 3 сутки Вы получаете название микроорганизма, который был обнаружен в исследуемом образце, а также его чувствительность к антибиотикам. (!) Срок исследований в автоматическом методе продлен до 5 суток за счет длительного роста грибов рода Candida.

2. Точность.  Автоматический анализатор дает возможность быстро и очень точно определить какой именно из 400 микроорганизмов есть в биоматериале.

3. Большой спектр антибиотиков к которым определяется чувствительность позволяет врачу назначить наиболее рациональную антибиотикотерапию с учетом характера заболевания и особенностей пациента. К тому же определение чувствительности таким методом является максимально быстрым и точным по сравнению с классическим.

Важно! В результате микробиологического исследования проведенного автоматическим методом антибиотикочувствительность издается с показателем МИК * (минимальная ингибирующая концентрация)

Просмотров: 79224