Класичний бактеріологічний метод

Бактеріологічний (культуральний) метод дослідження полягає у виявленні патогенних мікроорганізмів і визначенні їх чутливості до антибіотиків. Процес виявлення мікроорганізмів складається з декількох етапів:

1. 1. Посів матеріалу на поживні середовища.
2. 2. Отримання чистих культур мікроорганізмів.
3. 3. Ідентифікація мікроорганізмів.
4. 4. Визначення чутливості до антибіотиків, антімікотіков.

Перший і другий етапи бактеріологічного дослідження однакові і для класичного, і для автоматичного бактеріологічних методів.

Перший етап

Біологічний матеріал висівають на живильні середовища. Для кожного виду біологічного матеріалу використовується певний набір. Це пов'язано з тим, що в різних видах біологічного матеріалу знаходяться різні види мікроорганізмів і необхідно, щоб виросли максимально усі. Використовуються поживні середовища загального призначення - на них зростає переважна більшість мікроорганізмів - кров'яний агар, шоколадний агар; диференціальні середовища - дозволяють відрізняти різні види мікроорганізмів - середовище Ендо для ентеробактерій, селективні середовища - ростуть тільки окремі види бактерій - ентерококагар для виявлення ентерококів, манітол-сольовий агар для виявлення стафілококів.

Посів роблять таким чином, щоб отримати окремі ізольовані колонії.

Посіви поміщають в термостат, як правило, на 24 год при 37С. Деякі посіви інкубують при 28С, а деякі протягом 48 годин. Посіви для виявлення грибів роду Candida до 5 діб, міцеліальних грибів - до 30 діб.

Другий етап.

Переглядають посіви на поживних середовищах. За зовнішнім виглядом колоній (розмір, колір, форма), певними швидкими тестами і мікроскопією визначають можливий вид мікроорганізмів і їх значення в конкретному випадку. Вибрані колонії відсівають на універсальні поживні середовища для накопичення чистої культури мікроорганізмів. У разі зростання колоній тільки одного виду можна проводити ідентифікацію і визначення чутливості без етапу накопичення чистої культури.

Третій етап.

Залежно від виду мікроорганізму проводять його ідентифікацію (визначення біохімічних і антигенних властивостей) за допомогою фіксованого набору субстратів і сироваток. Субстратами є вуглеводи, амінокислоти та інші складні сполуки. За результатами встановлюють рід і вид мікроорганізму.

Для встановлення виду деяких мікроорганізмів може знадобитися серологічна ідентифікація.

Всі середовища для ідентифікації та визначення чутливості до антибіотиків готуються і стерилізуються окремо. Така процедура дуже трудомістка, тобто вимагає багато ручної праці і часу, додаткового обладнання. Таким чином у даного методу низький рівень стандартизації.

Для ідентифікації деяких вимогливих клінічно значущих видів мікроорганізмів необхідні складні і дорогі субстрати, які в рутинній практиці важко готувати і використовувати. Через це спектр мікроорганізмів, які можна було б ідентифікувати, звужується в порівнянні з можливостями автоматичного аналізатора.

Четвертий етап.

Визначення чутливості до антибіотиків проводиться з урахуванням результатів ідентифікації та виду біологічного матеріалу.

При використанні класичного бактеріологічного методу, визначення чутливості до антибіотиків відбувається диско-дифузійним методом. Цей метод базується на вивченні зон затримки росту мікроорганізму навкруги паперового диска, який просочений антибіотиком. Залежно від зон затримки росту визначають стійкі, помірно-стійкі та чутливі штами мікроорганізмів до того чи іншого антибіотика. Даний метод є найбільш поширеним для вивчення чутливості, а також дешевим і простим у виконанні. Однак він також погано піддається стандартизації, оскільки вимагає багато ручної праці.

Крім того, відповідно до рекомендацій міжнародних організацій, які займаються вдосконаленням існуючих методик і розробкою нових (EUCAST - Європейський комітет з визначення чутливості до антибіотиків, CLSI - Інститут клінічних лабораторних стандартів), чутливість до деяких антибіотиків МОЖНА визначати диско-дифузійним методом, оскільки не визначені критерії оцінки отриманих результатів.

Це стосується:

• 1. колістином - кишкова паличка, клебсієла і інші ентробактеріі, синьогнійна паличка, ацинетобактер,
• 2. бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини, карбапенеми), глікопептиди (ванкоміцин, тейкопланін), даптоміцином, фосфоміцин - стафілококи,
• 3. даптоміцином - стрептококи груп А, В, С і G,
• 4. меропенем - пневмококи при менінгітах
• 5. бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини, карбапенеми) - пневмококи.

Крім того існують мікроорганізми, чутливість яких до антибіотиків взагалі не можна визначати диско-дифузійним методом: Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, все анаеробні мікроорганізми, Helicobacter pylori, Candida spp., Aspergilus spp. та інші міцеліальні гриби.

В даний час проведення мікробіологічних досліджень є важливою і актуальною діяльністю в біології та медицині, так як вони дозволяють з високим ступенем точності і достовірності підтвердити або спростувати факт присутності в організмі людини збудників інфекційних захворювань. Класичний бактеріологічний метод дослідження вирішує завдання виділення чистої культури збудника з його подальшою ідентифікацією. Завдяки мікробіологічних методів дослідження можна встановити збудників тих чи інших інфекційних захворювань і підібрати раціональне лікування цього захворювання.

Переваги автоматичного методу

- Швидкість отримання результату. Результат наших досліджень є максимально швидким. Вже на 3 добу Ви отримуєте назву мікроорганізму, який був виявлений в досліджуваному зразку, а також його чутливість до антибіотиків. (!) Термін досліджень в автоматичному методі продовжений до 5 діб за рахунок тривалого росту грибів роду Candida.

- Точність. Автоматичний аналізатор дає можливість швидко і дуже точно визначити який саме з 400 мікроорганізмів є в біоматеріалу.

- Великий спектр антибіотиків до яких визначається чутливість дозволяє лікарю призначити найбільш раціональну антибіотикотерапію з урахуванням характеру захворювання та особливостей пацієнта. До того ж визначення чутливості таким методом є максимально швидким і точним у порівнянні з класичним.

Важливо! В результаті мікробіологічного дослідження проведеного автоматичним методом антибіотикочутливість видається з показником МІК * (мінімальна інгібуюча концентрація)

Переглядів: 79225